Laporan Praktikum Bakteriologi I " PEWARNAAN BTA (Basil Tahan Asam) "

                                       

 PEWARNAAN BTA (Basil Tahan Asam)

 

                                        NAMA     : Dirayanti Embong Bulan
                                        NIM        : PO.71.3.203.11.1.066
                                        KELAS   : B

 

         

POLTEKKES KEMENTERIAN KESEHATAN MAKASSAR

JURUSAN ANALIS KESEHATAN

TAHUN AJARAN 2011/2012

 

BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

   Dalam kehidupan sehari-hari tanpa disadari manusia selalu berhubungan dengan jasad renik dari alam dunia yang tidak tampak dengan mata biasa. Itu disebabkan karena bekteri merupakan organism yang sangat kecil (berukuran mikroskopis). Selainitu, bakteri tidak berwarna, juga transparan dan sangat kecil. Akibatnya pada mikroskop tidak tampak jelas dan sukar untuk melihat bagian-bagiannya. Sehingga untuk mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik pewarnaan sel bakteri, sehingga sel dapat terlihat jelas dan mudah diamati. Teknik pewarnaan sel bakteri ini merupakan salah satu cara yang paling utama dalam penelitian-penelitian mikrobiologi. Prinsip dasar dari pewarnaan ini adalah adanya ikatan ion antara komponen selular dari bakteri dengan senyawa aktif dari pewarna yang disebut kromogen. Terjadi ikatan ion karena adanya muatan listrik baik pada komponen seluler maupun pada pewarna. Berdasarkan adanya muatan ini maka dapat dibedakan pewarna asam dan pewarna basa.

Pengecatan bakteri sudah dilakukan sejak awal berkembangnya mikrobiologi dipertengahan abad ke-19 oleh Louis Pasteur dan Robert Koch. Cara-cara pengecatannya yaitu pewarnaan sederhana, pewarnaan gram, pewarnaan negatif, pewarnaan BTA, pewarnaan negatif, pewarnaan neisser (granula), dan pewarnaan spora.

Beberapa mikroba tertentu tidak dapat diwarnai dengan pewarnaan sederhana ataupun Gram, misalnya golongan Mycobacterium, Retinomycites, dll. Hal ini disebabkan sel-sel mikroba diliputi oleh semacam lilin (lipid) dan asam mycolat, sehingga tubuhnya sukar ditembus oleh zat-zat warna. Tetapi dia dapat diwarnai dengan karbolfuchsin panas (sambil dipanasi), ternyata zat warna ini dapat meresap dan diikat oleh tubuh bakteri tersebut. Keistimewaan dari kuman tahan asam ini, zat warna yang telah diikat itu sukar dilepaskan walaupun dilakukan dengan pencucian dengan alkohol-asam, misalnya asam sulfat dan asam chlorida. Oleh karena kuman-kuman seperti itu tahan terhadap pencucian asam-asam mineral, maka disebut kuman tahan asam. Pewarnaan ini ditujukan terhadap bakteri yang mengandung lemak dalam konsentrasi tinggi sehingga sukar menyerap zat warna, namun jika bakteri diberi zat warna khusus misalnya karbolfukhsin melalui proses pemanasan, maka akan menyerap zat warna dan akan tahan diikat tanpa mampu dilunturkan oleh peluntur yang kuat sekalipun seperti asam-alkohol. Karena itu bakteri ini disebut bakteri tahan asam (BTA).

1.2. Maksud dan Tujuan

1.2.1.      Maksud dari praktikum, adalah:

a.       Mengetahui prosedur pewarnaan BTA (Basil Tahan Asam).

b.      Mengidentifikasi bentuk/morfologi BTA pada sampel.

c.       Mengetahui sifat bakteri BTA dengan bakteri lainnya.

                                                 

1.2.2.       Tujuan dilakukannya praktikum,adalah:

a.       Membuat  sediaan untuk pewarnaan BTA (Basil Tahan Asam)

b.      Melakukan proses pewarnaan BTA.

c.       Melihat bentuk dan warna bakteri pada sediaan.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

   Bakteri merupakan organisme prokariot. Umumnya ukuran bakteri sangat kecil,  bentuk tubuh bakteri baru dapat dilihat dengan menggunakan mikroskop dengan pembesaran 1.000 X atau lebih (Waluyo, 2004). Sel bakteri memiliki panjang yang beragam, sel beberapa spesies dapat berukuran 100 kali lebih panjang daripada sel spesies yang lain. Bakteri merupakan makhluk hidup dengan ukuran antara 0,1 sampai 0,3 µm. Bentuk bakteri bermacam – macam yaitu elips, bulat, batang dan spiral. Bakteri lebih sering diamati dalam olesan terwarnai dengan suatu zat pewarna kimia agar mudah diamati atau dilihat dengan jelas dalam hal ukuran, bentuk, susunan dan keadaan struktur internal dan butiran.Sel sel individu bakteri dapat berbentuk seperti bola/elips, batang (silindris), atau spiral (heliks) (Pelczar & Chan, 2007).

Pewarnaan bakteri bertujuan untuk memudahkan melihat bakteri dengan mikroskop, memperjelas ukuran dan bentuk bakteri, untuk melihat struktur luar dan struktur dalam bakteri seperti dinding sel dan vakuola, menghasilkan sifat-sifat fisik dan kimia yang khas daripada bakteri dengan zat warna, serta meningkatkan kontras mikroorganisme dengan sekitarnya. Teknik pewarnaan warna pada bakteri dapat dibedakan menjadi tiga macam yaitu pengecatan sederhana, pengecatan diferensial dan pengecatan struktural. Pemberian warna pada bakteri atau jasad- jasad renik lain dengan menggunakan larutan tunggal suatu pewarna pada lapisan tipis, atau olesan, yang sudah difiksasi, dinamakan pewarnaan sederhana. Prosedur pewarnaan yang menampilkan perbedaan di antara sel-sel mikroba atau bagian-bagian sel mikroba disebut teknik pewarnaan diferensial (Pelczar & Chan, 2007).

Zat warna adalah senyawa kimia berupa garam-garam yang salah satu ionnya berwarna.Garam terdiri dari ion bermuatan positif dan ion bermuatan negatif.Senyawa-senyawa kimia ini berguna untuk membedakan bakteri-bakteri karena reaksinya dengan sel bakeri akan memberikan warna berbeda. Perbedaan inilah yang digunakan sebagai dasar pewarnaan bakteri.Sel-sel warna dapat dibagi menjadi dua golongan yaitu asam dan basa.Jika warna terletak pada muatan positif dari zat warna, maka disebut zat warna basa.Jika warna terdapat pada ion negatif, maka disebut zat warna asam.Contoh zat warna basa adalah methylen blue, safranin, netral red, dan lain-lain. Sedangkan anionnya pada umumnya adalah Cl^-, SO₄^-, CH₃COO^-, COOHCOO^?. Zat warna asam umumnya mempunyai sifat dapat bersenyawa lebih cepat dengan bagian sitoplasma sel sedangkan zat warna basa mudah bereaksi dengan bagian-bagian inti sel. Pewarnaan bakteri dipengaruhi oleh faktor-faktor seperti : fiksasi, peluntur warna, substrat, intensifikasi pewarnaan dan penggunaan zat warna penutup (Sutedjo, 1991).

Prinsip dasar dari pewarnaan adalah adanya ikatan ion antara komponen selular dari bakteri dengan senyawa aktif dari pewarna yang disebut kromogen. Ikatan ion dapat terjadi karena adanya muatan listrik baik pada komponen seluler maupun pada pewarna. Terdapat tiga macam metode pewarnaan yaitu pewarnaan sederhana, pewarnaan diferensial dan pewarnaan gram. Pewarnaan sederhana menggunakan pewarna tunggal, pewarnaan diferensial memakai serangkaian larutan pewarna atau reagen. Pewarnaan gram merupakan metode pewarnaan yang paling umum digunakan untuk mewarnai sel bakteri (Umsil, 2008).

Zat pewarna adalah garam yang terdiri atas ion positif dan ion negatif, salah satu di antaranya berwarna. Pada zat warna yang bersifat basa, warna terdapat pada ion positif (zat pewarna⁺ Cl^-) dan pada pewarna asam, warna akan terdapat pada ion negatif (zat pewarna^- Na⁺). Hubungan antara bakteri dengan zat pewarna basa yang menonjol disebabkan terutama oleh adanya asam nukleat dalam jumlah besar dalam protoplasma sel. Jadi, jika bakteri itu diwarnai, muatan negatif dalam asam nukleat bakteri akan bereaksi dengan ion positif zat pewarna basa, Kristal violet, safranin dan metilin blue adalah beberapa zat pewarna basa yang biasa digunakan. Sebaliknya zat pewarna asam ditolak oleh muatan negatif bakteri menyeluruh. Jadi, mewarnai bakteri dengan zat pewarna asam akan menghasilkan hanya pewarnaan pada daerah latar belakang saja. Karena sel bakteri tak berwarna di atas latar belakang yang berwarna (Volk & Wheeler, 1993).

Secara garis besar teknik pewarnaan bakteri dapat dikategorikan sebagai berikut: pewarnaan sederhana, pewarnaan differensial (pewarnaan gram dan pewarnaan tahan asam), pewarnaan khusus untuk melihat struktur tertentu : pewarnaan flagel, pewarnaan spora, pewarnaan kapsul, pewarnaan khusus untuk melihat komponen lain dan bakteri (pewarnaan Neisser (granula volutin), pewarnaan yodium (granula glikogen) dan  pewarnaan negatif (Gozali, 2009).

 Pewarnaan BTA dapat dibedakan menjadi 2 golongan, yaitu bakteri tahan asam  yang akan tetap mengikat zat pewarnaan primer (karbol fuksin) dan tidak akan dilepas pada pencucian alkoholm asam, serta tidak akan mengikat zat warna sekunder (methylen blue), sedangkan bakteri tidak  tahan asam akan melepaskan zat warna  primer pada pencucian alcohol asam  dan akan mengikat zat warna  sekunder.Ada beberapa  cara  mewarnai bakteri tahan asam yaitu, menurut Ziehl-Neelseen, menurut Tan Thiam Hok (1957) yang disebut juga pewarnaan Kinyoun-Gabbet, serta pewarnaan dengan AURAMEN-PHENOL FLUORCHROME.

 Teknik pewarnaan ini dapat digunakan untuk mendiagnosa keberadaan bakteri penyebab tuberkulosis yaitu Mycobacterium tuberculosis . Ada beberapa cara pewarnaan tahan asam, namun yang paling banyak adalah cara menurut Ziehl-Neelsen.(anonymous,2009).

BAB III

ALAT,BAHAN, DAN METODE KERJA

 3.1. Alat

Adapun alat yang digunakan pada praktikum pewarnaan BTA (Basil Tahan Asam), yaitu:

Ø  Mikroskop

Ø  Objek glass steril

Ø  Bunsen

Ø  Jembatan pewarnaan

Ø  Korek api

Ø   Lidi

3.2. Bahan                         

Adapun bahan yang digunakan pada praktikum pewarnaan BTA (Basil Tahan Asam),  yaitu:

Ø  Sampel(Sputum penderita TBC)

Ø  Karbol fuchsin

Ø  Methylen Blue

Ø  Asam Alkohol

Ø  Kinyoun

Ø  Gabbet

Ø  Oil imersi

3.3. Metode Kerja

a.)    Metode Ziehl – Neelsen:

1.      Alat, dan bahan yang akan digunakan disiapkan secara lengkap.

2.      Selanjutnya sampel sputum diambil dengan batang lidi, lalu dibuat sediaan di atas objek glass dengan putaran satu arah hingga didapatkan sediaan yang tipis dan rata.

3.      Sediaan kemudian dikeringkan di udara, dilakukan fiksasi dengan melewatkan  di atas api sebanyak 3X.

4.      Pewarnaan pertama dilakukan dengan menggenangi sediaan dengan Carbol Fuchsin selama 5 menit sambil dipanaskan hingga menguap sebanyak 3X pemanasan.

5.      Membuang zat warna kemudian, sediaan dibilas dengan air mengalir.

6.      Kemudiaan dilakukan pelunturan dengan asam alkohol selama 30 detik, lalu sediaan dibilas dengan air mengalir.

7.      Selanjutnya pewarnaan kedua dilakukan dengan menggenangi sediaan dengan Methylen Blue selama 1-2 menit.

8.      Membuang zat warna, kemudian sediaan dibilas dengan air mengalir.

9.      Sediaan dikeringkan di udara.

10.  Kemudiaan preparat ditetesi dengan oil imersi dan siap untuk diamati di bawah mikroskop dengan pembesaran objetif 100 X.  

  

b.)   Metode Kinyoun – Gabbet

1.      Alat, dan bahan yang akan digunakan disiapkan secara lengkap.

2.      Selanjutnya sampel sputum diambil dengan batang lidi, lalu dibuat sediaan di atas objek glass dengan putaran satu arah hingga didapatkan sediaan yang tipis dan rata.

3.      Sediaan dikeringkan di udara kemudian, dilakukan fiksasi dengan melewatkan  di atas api sebanyak 3X.

4.      Pewarnaan pertama dilakukan dengan menggenangi sediaan dengan Kinyoun selama 2-3  menit.

5.      Membuang zat warna, kemudian sediaan dibilas dengan air mengalir.

6.      Selanjutnya pewarnaan kedua dilakukan dengan menggenangi sediaan dengan Gabbet selama 30 detik.

7.      Membuang zat warna, kemudian sediaan dibilas dengan air mengalir.

8.       Sediaan dikeringkan di udara.

9.      Kemudiaan preparat ditetesi dengan oil imersi dan siap untuk diamati di bawah mikroskop dengan pembesaran objetif 100 X.       

BAB IV

HASIL PENGAMATAN

4.1. Hasil Pengamatan

a.)    Metode Ziehl - Neelsen

 

                                       

 

                                                      

 

                                    Ket:

1.       

2.       

3.       

                                                                                        1

                 1

                Keterangan  :

1.      Bakteri BTA berbentuk basil

b.)   Metode Kinyoun – Gabbet

                                       

                                                                      

 

                                

                               

 

                                   Ket:

1.       

2.       

                                                                                                                              1

                          1

Keterangan  :

1.      Bakteri BTA berbentuk basil

 4.2. Pembahasan

Pewarnaan BTA merupakan pewarnaan yang ditujukan terhadap bakteri yang mengandung lemak dalam konsentrasi tinggi sehingga sukar menyerap zat warna, namun jika bakteri diberi zat warna khusus misalnya karbol fukhsin melalui proses pemanasan, maka akan menyerap zat warna dan akan tahan diikat tanpa mampu dilunturkan oleh peluntur yang kuat sekalipun seperti asam-alkohol. Karena itu bakteri ini disebut bakteri tahan asam (BTA). Teknik pewarnaan ini dapat digunakan untuk mendiagnosa keberadaan bakteri penyebab tuberkulosis yaitu Mycobacterium tuberculosis .

.Dari pewarnaan BTA dapat dibedakan 2, yaitu  golongan bakteri tahan asam  yang akan tetap mengikat zat pewarnaan primer (karbol fuksin) dan tidak akan dilepas pada pencucian alkohol asam, serta tidak akan mengikat zat warna sekunder (methylen blue), sedangkan bakteri tidak  tahan asam akan melepaskan zat warna  primer pada pencucian alcohol asam  dan akan mengikat zat warna  sekunder. Ada beberapa  cara  mewarnai bakteri tahan asam yaitu, menurut Ziehl-Neelseen, menurut Tan Thiam Hok (1957) yang disebut juga pewarnaan Kinyoun Gabelt, serta pewarnaan dengan AURAMEN-PHENOL FLUORCHROME. Pewarnaan ini adalah segolongan bakteri yang sulit diwarnai, tetapi sekali  diwarnai sulit dihapus. Dinding  sel bakteri tahan asam terdiri dari peptidogikan, arabinogalaktan, dan lipid, dimana 50% dari lipid ini terdiri dari asam nikolat. Bakteri ini dimasukkan kedalam golongan mikrobacterium yang sebagian besar bersifat satprofit, dikenal juga golongan atipik , sebagian kecil pathogen bagi manusia yaitu Mycrobaterrium tuberculosis dan Mycrobacterium leprae.

Pewarnaan Ziehl Neelson atau pewarnaan tahan asam memilahkan kelompok Mycobacterium dan Nocandia dengan bakteri lainnya. Kelompok bakteri ini disebut bakteri tahan asam karena dapat mempertahankan zat warna pertama (carbol fuchsin) sewaktu dicuci dengan larutan pemucat (alkohol asam).Larutan asam terlihat berwarna merah, sebaliknya pada bakteri yang tidak tahan asam karena larutan pemucat (alkohol asam) akan melakukan reaksi dengan carbol fuchsin dengan cepat, sehingga sel bakteri tidak berwarna (Lay, 1994).
Uji bakteri tahan asam (BTA) pada praktikum kali ini menggunakan prosedur pewarnaan Ziehl Neelson yaitu dengan memberi larutan pewarna carbol fuchsin, alkohol asam, dan methylen blue. Hasil yang diperoleh saat praktikum yaitu positif 1 dan positif 2 yang dilaporkan secara kuantitatif menurut IUAT, yaitu:
Negatif: apabila tidak ditemukan BTA.
Positif: apabila terdapat 1–9 BTA/100 lapang pandang.
Positi1: apabila terdapat 10–90 BT/100 lapang pandang.
Positif2:apabila terdapat 1–9 BTA/1 lapang pandang.
Positif3:apabila terdapat > 10 BTA / 1 lapang pandang.

Dari hasil praktikum yang dilakukan, pada metode Ziehl-Neelsen ditemukan bakteri yang berbentuk basil dan berwarna merah karena menyerap zat warna pertama yaitu Carbol Fuchsin.Sedangkan pada metode Kinyoun- Gabbet ditemukan bakteri yang bebentuk basil dan berwarna merah karena menyerap zat warna pertama yaitu Kinyoun.

BAB V

KESIMPULAN dan SARAN

51. Kesimpulan

             Dari hasil praktikum yang diamati ditemukan bakteri BTA (+)  yang berbentuk basil.

  5.2. Saran

     Adapun saran yang ingin penulis (praktikan) sampaikan melalui laporan ini adalah sebagai berikut :

a.        Membaca dan mempelajari protab terlebih dahulu sebelum melakukan praktikum.

b.      Menggunakan APD pada saat praktikum.

c.       Mengikuti protab pada saat praktikum

d.      Tidak menukar-nukar pipet untuk menghindari kontaminasi antar larutan.

DAFTAR PUSTAKA

Krisno. Agus, 2011, ,http://aguskrisnoblog.wordpress.com/2011/01/12/macam-macam-teknik-pewarnaan-bakteri/.html.. Diakses pada tanggal 6 Juni 2012

Hadiotomo, Ratna Siri., 1990. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. Jakarta : Pt Gramedia.

Pelezar,chan. 2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi. UI Press: Jakarta

Jawetz, Melnick, Adelberg, 2008, Mikrobiologi Kedokteran, edisi 23, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
Iud W, 2008, Teknik dan Metode Dasar Dalam Mikrobiologi, UMM Pres, Malang.